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小鼠腸道菌群研究第一步--“無菌采便”需關注

發布時間:2024-04-16
腸道微生物群的檢測方法眾多,通過研究小鼠糞便中微生物的群落結構來反映腸道微生態是許多研究人員選用的方法

腸道中含有數量巨大的微生物,這些微生物在維持人類生命健康方面發揮著重要作用。近來研究發現腸道微生物與炎性腸?。?/span>IBD)、結直腸癌(CRC)、肥胖、二型糖尿病等多種疾病密切相關。因此,加強對腸道微生態的了解有助于對一些腸道疾病的診斷及治療。

腸道微生物群的檢測方法眾多,通過研究小鼠糞便中微生物的群落結構來反映腸道微生態是許多研究人員選用的方法。采集糞便簡單,易操作,但具體如何操作,如何避免糞便樣本被雜菌污染,仍有諸多細節需要注意。

采集流程

1準備采便所需器材
采便器,鑷子或者牙簽,紙巾,采集管,酒精噴壺,冰盒,超凈臺

注:如果沒有采便器,可以使用滅菌后的空鼠籠代替

2高溫高壓或紫外滅菌器材
采便器或者空鼠籠,鑷子或者牙簽,紙巾,采集管通過高溫高壓滅菌后傳入動物房。無法通過高溫高壓滅菌的,紫外線照射30分鐘后通過傳遞窗傳入。然后將器材放置超凈臺。

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3 促使小鼠應激排便,或者將小鼠放入采便器,等待自然排便

應激排便:采集樣本較少(1-2顆)及小鼠排便正常時,可以直接應激排便,固定小鼠,將其尾部提起,用手指輕輕按壓小鼠下腹部,小鼠排便后及時采集到無菌的EP管中。

自然排便:采集樣本較多時,將小鼠放入采便器或者空鼠籠,等待小鼠自然排便。小鼠排便過程中,及時采集小鼠糞便,避免小鼠將糞便踩踏污染。小鼠排便到足夠的數量后及時將小鼠放回飼養籠中。

注:如果使用空鼠籠,需要鋪墊紙巾,避免小鼠尿液污染,采便器中層有紗網,尿液可以直接漏下去。小鼠活動面積越大,越能避免踩踏糞便。

2.png4 取出糞便及保存

使用鑷子或者牙簽采取糞便,采取下一只小鼠糞便的時候,需要酒精擦拭鑷子或者換一根新的牙簽,避免不同小鼠之間糞便污染。將采取的糞便及時放入采集管,置于冰盒中,最后及時轉入-80℃冰箱保存。如果糞便形狀不同,或者有便血的情況,需要做好記錄。

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注意事項

1糞便樣本采集在一天的同一時段進行(最好是早晨)避免微生物組成在同一天不同時間內發生變化。采集糞便場所光線充足,保持通風。

2 采便過程中,需要時刻關注小鼠排便情況,及時采取,避免踩踏污染。

3無菌采便需要的器械必須高溫高壓和或者紫外滅菌,在超凈臺使用。

如小鼠不排便,可順時針按摩腹部或者使用濕棉簽擦拭肛門,促進排便。

采便時觀察小鼠糞便形狀以及是否便血,做好糞便記錄。

6 取出的糞便及時放到冰上,最終轉入-80℃冰箱保存。

在實驗飼養期間,要盡量保持整個過程中飼料和墊料的一致性,最好采用同一批次