新型冠狀病毒（2019-nCoV）是冠狀病毒，由RNA核酸和蛋白等組成，RNA很容易降解，蛋白衣殼將RNA包裹在其中，加上一層由脂質(zhì)和糖蛋白組成的包膜外衣，從而使其RNA得到保護(hù)。病毒通過特定細(xì)胞表面的受體入侵細(xì)胞造成感染，并且利用宿主細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制增殖。冠狀病毒亞科分為α、β、γ和δ四個(gè)屬，新型冠狀病毒屬于β屬。新型冠狀病毒與中東呼吸綜合征相關(guān)冠狀病毒MERSr-Cov、嚴(yán)重急性呼吸綜合征相關(guān)冠狀病毒SARSr-Cov一樣，都會(huì)引起上呼吸道感染，可引起肺炎、甚至重癥肺炎，且可人傳人。

圖片來源：美國衛(wèi)生研究院（NIH）官網(wǎng)

中國科學(xué)院武漢病毒研究所石正麗團(tuán)隊(duì)從早期的5位患者樣本中獲得了該病毒的全基因組序列。從支氣管肺泡灌洗液(BALF)中收集五個(gè)重癥患者的樣本(WIV04)，采用測序NGS的宏基因組學(xué)分析方法，在1038758個(gè)總讀長或人類基因組篩選獲得的1582個(gè)總讀長中，有1378個(gè)(87.1%)序列與SARSr-CoV匹配(圖2a)。該病毒基因組由冠狀病毒常見的6個(gè)主要開放閱讀框(ORFs)和一些其他輔助基因組成(圖2b)。

圖2來源：Peng Zhou，Zheng-Li Shi，et al.

目前新型冠狀病毒的常規(guī)檢測方法為核酸檢測：實(shí)時(shí)熒光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）方法。其檢測原理為：一條RNA鏈逆轉(zhuǎn)錄成為互補(bǔ)DNA，再以此為模板通過PCR進(jìn)行DNA片段擴(kuò)增，再通過熒光探測來標(biāo)定擴(kuò)增的DNA片段是否存在。該方法能夠檢測細(xì)胞中的RNA病毒的含量。我國國家衛(wèi)健委提出的針對新型冠狀病毒的檢測標(biāo)準(zhǔn)，需要對病毒的多個(gè)保守目標(biāo)序列上的兩個(gè)目標(biāo)靶點(diǎn)（ORFlab、N）均進(jìn)行擴(kuò)增檢測，只有當(dāng)兩個(gè)都顯示陽性了，才能確診。

根據(jù)專家介紹，從現(xiàn)在的情況看，根據(jù)收集到的病毒樣本都是相同的，并沒有出現(xiàn)變異的情況。

從原理上來看，RT-qPCR是能夠直接快速從人體中找出是否存在新冠狀病毒RNA序列。我國在檢測過程中選用的是多個(gè)保守目標(biāo)序列，即不容易發(fā)生變異的學(xué)歷片段上的靶點(diǎn)。

核酸檢測方法的最大特點(diǎn)是特異性高、靈敏度高，但最大的弱點(diǎn)是易受污染影響。樣本采集的時(shí)間，方法以及處理均會(huì)對檢測結(jié)果有影響。

根據(jù)中國國家衛(wèi)健委頒布的《新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)指南》，采集標(biāo)本的種類里有上呼吸道標(biāo)本（咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物），下呼吸道標(biāo)本（深咳痰液、呼吸道抽取物、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液、肺組織活檢標(biāo)本），血液標(biāo)本，血清標(biāo)本，后來又增加了糞便、肛拭子。而在實(shí)際操作中，采取最多的是咽拭子、鼻拭子之類的上呼吸道標(biāo)本。一些特定的疑似感染的患者，不同的病期，在不同的身體部位出現(xiàn)病毒的濃度會(huì)有差異，如咽部沒有，但可能糞便中有。因此會(huì)出現(xiàn)“假陰性”的結(jié)果。

采集時(shí)讓患者張大嘴后用特制棉簽或小刷頭刮取其咽部采集帶病毒標(biāo)本。如果平時(shí)醫(yī)護(hù)人員咽拭子取樣不多，刮取標(biāo)本時(shí)患者的反應(yīng)又比較大，往往導(dǎo)致刮取標(biāo)本的位置不對，或力度和時(shí)間不夠，沒有刮取到帶病毒的標(biāo)本或刮取到的帶病毒標(biāo)本量少，最后導(dǎo)致檢測結(jié)果陰性。

一旦在實(shí)現(xiàn)過程中操作不當(dāng)，出現(xiàn)污染，如RNA酶污染，則會(huì)直接影響檢測結(jié)果。此外對樣本的處理保存也有嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)。2019-nCoV為RNA病毒，很容易被外源性或細(xì)胞破壞后所釋放的RNA酶降解，而影響最后的檢測效率。建議標(biāo)本采集后及時(shí)送檢，及時(shí)檢測（4小時(shí)）。如因某些原因標(biāo)本采集后不能及時(shí)送檢或及時(shí)檢測，應(yīng)將其置保存：4℃，＜24小時(shí)； -70℃以下，≥24小時(shí)；并且避免反復(fù)凍融。

還有一種可能性，檢測本身是準(zhǔn)確的，只是這些患者在做前幾次檢測的時(shí)候還沒有感染。然而，隨著時(shí)間進(jìn)程，他們后來被感染了，最終檢測結(jié)果呈陽性，確診。

對于新冠病毒的核酸檢測，無論是在規(guī)范樣本采集還是提高試劑檢測靈敏度等等方面，都是需要完善的。核酸檢測仍是當(dāng)前最準(zhǔn)確和靈敏的新冠病毒檢測方法。專家指出，對高度懷疑的有流行病學(xué)史的病例，還是要多次采樣，此外還應(yīng)該根據(jù)病人在臨床上的癥狀、體征等情況以及CT影像等其他檢測結(jié)果來綜合判斷。

總之，病毒沒有出現(xiàn)變異，疑似患者首先要做的仍舊是及時(shí)隔離，接受檢查。面對疫情，我們自身要做好防護(hù)工作，勤洗手，多通風(fēng)，出門戴口罩，不信謠，不傳謠！沒有一個(gè)冬天不會(huì)逾越，沒有一個(gè)春天不會(huì)到來，中國加油！

參考文獻(xiàn)：

[1]Zhou P,Zhou P, Yang XL, et al.Wang XGPneumoniaoutbreak is associated with a novel coronavirus of likely bat origin.Nature.2020 Feb 3. doi: 10.1038/s41586-020-2012-7.

[2]國家衛(wèi)健委