細胞毒性是指由細胞或者化學物質引起的單純的細胞殺傷事件,不依賴于凋亡或壞死的細胞死亡機理。
CCK-8實驗原理:
CCK-8 試劑中含有 WST–8 ,它在電子載體 1- 甲氧基 -5- 甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產物,生成的甲臜物的數量與活細胞的數量成正比。用酶聯免疫檢測儀在 450nm 波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。
優點 :
靈敏度高,數據可靠,重復性好,操作簡便,省時省力,毒性小
實驗流程:
1、取對數生長期細胞接種至96孔板中,每孔加入細胞懸液100ul,2000~5000個細胞
2、待細胞貼壁后,換入100ul含不同濃度待測樣品的完全培養基
3、根據實驗要求,待藥物作用24h、48h或72h后加入10ulCCK8溶液,繼續培養1~4h
4.、取出96孔板,放置酶標儀450 nm處檢測吸光。
實驗孔設置:
1、空白組(綠色):培養基
2、對照組(粉色):培養基+細胞+PBS
3、給藥組(紅色):培養基+細胞+待測樣品
4、白色孔加入100ulPBS或培養基,以緩解蒸發
注意事項:
1.細胞懸液加入96孔板前,應充分混勻,以免每孔加入細胞量不相等。
2、96 孔板周圍一圈液體容易蒸發,應當加入等量的PBS 或培養基,以緩解蒸發。
3、CCK-8 的培養時間一般為1~4 h,重復實驗必須保證相同培養時間。
4、CCK-8試劑顏色與培養基顏色幾乎相同,必須集中注意力加入,以免漏加。
5、酶標儀檢測吸光度時,震蕩時間不能少于15 S,以免孔內試劑顏色不勻。