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小鼠行為學實驗(上)

發布時間:2024-04-19
小鼠行為學實驗是研究人類發病機制、評價疾病模型造模效果和新藥效果的一種重要實驗手段

小鼠行為學實驗是研究人類發病機制、評價疾病模型造模效果和新藥效果的一種重要實驗手段,在生命科學、醫學、藥學等領域中被廣泛應用。小鼠行為學實驗可以科學客觀地評價其溝通、社交、學習和探索能力等。

 

行為學實驗均采用同窩對照原則,將實驗組和對照組小鼠每組取 10 只左右進行實驗,小鼠的飼養條件為:4-5只同性別小鼠飼養于底部墊鋸末碎屑的透明塑料箱,自由飲水和喂食,飼養室恒溫(25±0.5℃)、恒濕(50-60%)、環境安靜、通風。

 

在行為學實驗前由實驗人員對小鼠進行為期一周的撫摸,每天5min,并且在測試前30-60 min將小鼠帶入測試室,讓其適應實驗環境,避免搬運過程和新環境給小鼠帶來焦慮情緒,實驗室應當保持安靜,禁止在同一實驗室內處死動物或對動物進行采血。

 

 

(一)曠場實驗

 

?小鼠在新異環境中對新奇事物充滿好奇,會出現探索行為,但也有畏懼空曠場地的天性,從而出現趨避行為。曠場實驗(Open Field Test,OFT)就是利用小鼠的天性,對其緊張度和探索性行為進行判斷,系統評估小鼠的探索能力、基本運動能力以及焦慮行為。

 

每個曠場試驗箱的尺寸為40cm*40cm*35cm,需將小鼠提前30-60min放置在實驗區域附近。實驗時把小鼠輕放在箱子中央,讓小鼠在實驗箱內自由探索30min,用視頻軟件錄制小鼠30min內的運動軌跡,并用視頻分析軟件進一步分析小鼠在30min內運動的總距離、在中心位置停留的時間及前5min內運動的總距離和在中心位置停留的時間。在實驗前后均用75%酒精充分擦拭實驗裝置,避免氣味對實驗結果造成影響。如果小鼠更傾向于在曠場試驗箱中間運動,解讀為抗焦慮行為,反之則為焦慮行為。

 

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()埋珠實驗

 

?埋珠實驗(Marble Burying Test)是檢測小鼠是否出現刻板行為的主要手段,首先準備干燥清潔的40cm*30*22cm的飼養盒,底部鋪5cm厚的墊料,把準備好的20顆標準玻璃珠(直徑14mm-15mm)按4列5行均等擺放在墊料上,把小鼠輕放至盒子的同一個角,測試30min,如果玻璃珠超過三分之二的部分被墊料覆蓋,則認為該玻璃珠被小鼠掩埋。記錄測試小鼠掩埋的玻璃珠數量,數量越多,說明小鼠越刻板。

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 ()Y迷宮實驗

 

?Y迷宮實驗(Y-maze Test)模型用來研究小鼠的空間識別記憶能力,這種迷宮利用了小鼠對新異環境天然探究的自然習性,不需要動物學習任何規則來趨利避害,能夠有效地反映出動物對新異環境的識別記憶能力,本實驗采用磨砂非透明有機塑料,按“Y”的形狀制作,分為A,B,C三個臂(長35cm,寬10cm,高20cm),三個臂之間的夾角均為120°。實驗開始時,把小鼠按同一方向放置在三個臂的交界處,任其在裝置內穿梭,記錄5min內小鼠進入各臂的順序,小鼠進入各臂三分之二及以上處記為成功進入該臂,否則不算進入。為了消除動物之間的氣味,保證實驗儀器的環境衛生,在實驗前后均使用75% 酒精進行擦拭,待酒精揮發干凈再進行下一輪實驗,味道和殘留的酒精均會影響實驗動物的行為結果。實驗結束后分析進入各臂的順序,按“ABC” “ACB” “BCA”“BAC”“CAB”“CBA”出現的形式記為正確轉換。正確轉換率=(正確轉換次數/總轉換次數)*100%,正確轉換率越高,說明小鼠空間識別記憶能力越強。

 

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(四)高架十字迷宮實驗

 

?高架十字迷宮(Elevated-plus maze Test,EPM)通常由兩段開臂和兩段閉臂構成,距離地面51cm,底部有一塊正方形底座,十字迷宮各臂長66cm,寬5.0cm,閉臂臂高15cm。小鼠由于嗜暗性會傾向于在閉臂中活動,但出于好奇心和探究性又會在開臂中活動,在面對新奇刺激時,動物同時產生探究的沖動與恐懼,這就造成了探究與回避的沖突行為,從而產生焦慮心理。高架十字迷宮實驗是一個簡單、快速評價小鼠是否焦慮的一種方法,因而廣泛應用于抗焦慮藥物的研究與開發。

 

儀器上方裝有視頻錄像,在實驗開始前將小鼠放入實驗房間適應1h,然后把小鼠輕放在十字迷宮的開臂與閉臂交接處的中心位置,測試開始前小鼠頭朝向開臂,釋放小鼠的同時點擊視頻采集,一共錄制5min視頻,觀察者距離迷宮中心至少1m,記錄小鼠進入開臂和閉臂的次數和在兩臂滯留時間(進出臂標準應嚴格界定,以四肢全部入臂或兩只前爪出臂為準),用SPSS軟件進行數據分析。計算小鼠進入開臂次數和在開臂滯留時間分別占總次數(進入開臂和閉臂次數總和)和總時間(在開臂與閉臂滯留時間總和)的百分比,以此評價動物是否焦慮,通常這兩個指標呈高度相關,抗焦慮行為表現為小鼠進入開壁次數的百分比和在開壁停留時間百分比均增加,焦慮行為則相反。

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總結 

好了,本期小鼠行為學實驗知識(上)分享就到此啦,小鼠行為學實驗知識(中)、(下)篇我們會持續分享,感興趣的小伙伴保持關注哦~歡迎大家在評論區討論,留言您想了解的話題或相關知識。靈賦拓普生物擁有整套行為學儀器設備,詳情可咨詢致電:0755-86325431,我們竭誠為您服務。