一、人類臨床信息
同種異體造血細(xì)胞移植是治療難以治愈的血液病的常規(guī)的、成熟的治療方法，其最常見的危及生命的并發(fā)癥是移植物抗宿主病（Graft versus Host Disease, GvHD）。當(dāng)供體組織（移植物）中的免疫功能正常的T細(xì)胞將受體（宿主）識別為外來物質(zhì)時(shí)，就會(huì)發(fā)生GvHD，其所產(chǎn)生的免疫反應(yīng)會(huì)激活供體T細(xì)胞，使其擁有溶解細(xì)胞的能力、攻擊受體以消除攜帶外來抗原的細(xì)胞。臨床上主要有急性GvHD（aGvHD）和慢性GvHD（cGvHD）兩種。在所有同種異體造血細(xì)胞移植患者中，30%-50%發(fā)生aGVHD；在接受同種異體造血干細(xì)胞移植(同種異體移植)的非操縱供體移植物，并接受鈣調(diào)磷酸酶抑制劑和抗代謝物的標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防的患者中，30%-70%發(fā)生cGvHD。典型的aGvHD體征包括皮膚斑丘疹、高膽紅素血癥伴肝臟膽汁淤積、小膽管損傷導(dǎo)致的黃疸、惡心、嘔吐和厭食，以及水樣或血性腹瀉和痙攣性腹痛（即累及皮膚、肝臟、上下消化道，還有肺臟）；cGvHD不僅累及aGvHD可累及到的臟器，還會(huì)影響其他多個(gè)臟器或系統(tǒng)，如：口腔、食管、骨骼與肌肉、關(guān)節(jié)、筋膜、眼睛、淋巴造血系統(tǒng)、頭發(fā)與指/趾甲、生殖系統(tǒng)等。常見皮膚、黏膜、軟組織的硬化、纖維化，高眼壓、肺臟纖維化^{[1, 2]}。

為了深入了解疾病機(jī)制、預(yù)后及生物標(biāo)志物的開發(fā)，cGvHD小鼠模型作為臨床前實(shí)驗(yàn)工具發(fā)揮了重大的作用。目前cGvHD小鼠模型主要有2種：①同種異體小鼠模型，主要用于研究cGvHD進(jìn)展機(jī)制和治療方法；②人源化小鼠模型，更利于臨床轉(zhuǎn)化。

1. 同種異體小鼠模型

通常使用具有不同的主要組織相容性復(fù)合體（major histocompatibility complex, MHC）的2種小鼠，分別作為供體和受體，最常見使用C57BL/6（H-2b）為供體、BALB/c（H-2d）為受體，或C57BL/6為供體，CB6F1（C57BL/6雄鼠與BALB/c雌鼠雜交的雌性后代）為受體（H-2d）。其中BALB/c作為受體時(shí)，稱為完全異基因移植，CB6F1作為受體時(shí)，稱為半相合基因移植。供體選擇雄性、受體選擇雌性小鼠，年齡多使用8±2周齡^[3]。
ABX小鼠構(gòu)建：由于受體動(dòng)物制備cGvHD模型前，需經(jīng)過輻照破壞自身原有免疫系統(tǒng)，這會(huì)使得受體變得非常脆弱，故通常給受體小鼠進(jìn)行腸道微生物清掃處理，形成抗生素清掃鼠（ABX鼠），一般使用萬古霉素、青霉素、甲硝唑、新霉素、紅霉素、慶大霉素、鏈霉素等抗生素進(jìn)行組合。在小鼠接收輻照前后若干天時(shí)間，在小鼠的飲用水中加入含有一定劑量的上述抗生素物質(zhì)飼喂小鼠（亦可使用灌胃+飲水方法），可形成ABX小鼠。
動(dòng)物輻照：根據(jù)受體鼠種類的不同，選擇合適的輻照方式及劑量。注意：市售輻照儀的射線源品種有所不同，如鈷60、X射線、γ射線等，不同射線由于散射程度、穿透能力等原因，會(huì)造成同劑量不同射線輻照效果有所區(qū)別，但一般不會(huì)過于明顯。建議與ABX劑量一起進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)條件摸索。
供體鼠PBMC懸液制備及受體回輸：處死供體鼠，摘取脾臟、長骨骨髓制備為單細(xì)胞懸液后，尾靜脈注射的方式回輸?shù)揭呀?jīng)接受動(dòng)物輻照的受體鼠體內(nèi)。其中，回輸?shù)募?xì)胞懸液的細(xì)胞濃度在5×10^6cells/ml-1×10^7cells/ml不等（有可能會(huì)更多，較少使用更少的劑量）。脾單細(xì)胞和骨髓單細(xì)胞可選分別注射、混合后一同注射、只選擇1種進(jìn)行提取制備并注射。最終可引起cGvHD模型病變程度的不同。

1. 人源化小鼠模型

GvHD模型在臨床上常見于同種異基因的個(gè)體間的移植，為了更貼合臨床研究，常使用人外周血單個(gè)核淋巴細(xì)胞（human peripheral blood mononuclear cells (hPBMCs)），代替小鼠的脾臟、骨髓單細(xì)胞懸液，用以回輸?shù)绞荏w小鼠體內(nèi)。hPBMC需要先通過MACS進(jìn)行磁珠分選（或無菌FACS流式分選），去除B細(xì)胞成分后再回輸?shù)叫∈篌w內(nèi)（部分研究不予去除B細(xì)胞成分）。小鼠同樣要接受輻照破壞免疫系統(tǒng)，之后接受新鮮hPBMC懸液的回輸^[4]。

1. 造模鑒定方法

    對于cGvHD，2005年美國國立衛(wèi)生研究院(NIH)共識會(huì)議建立了一套臨床上的評分標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)從器官層面出發(fā)，綜合評估了皮膚、頭發(fā)、指/趾甲、肝、肺、消化道、生殖器官等器官/系統(tǒng)的癥狀程度，以鑒定cGvHD綜合病情^[5]。2014年國家衛(wèi)生研究院的共識以新的證據(jù)為基礎(chǔ),以進(jìn)一步的完善為基礎(chǔ),維持了先前共識的框架，其在2005年頒布的版本上又進(jìn)行了若干調(diào)整^[6]。2014年共識標(biāo)準(zhǔn)明確了慢性GVHD的重疊亞類別，并建議記錄慢性GVHD患者的所有臨床特征，這些特征與預(yù)后、治療指導(dǎo)、反應(yīng)評估、生物標(biāo)志物研究和臨床試驗(yàn)相關(guān)。
進(jìn)行小鼠實(shí)驗(yàn)也有相應(yīng)的cGvHD臨床評分及組織病理學(xué)評分^{[7, 8]}。

【參考文獻(xiàn)】
[1] Zeiser R.,B. R. Blazar. Acute Graft-versus-Host Disease - Biologic Process, Prevention, and Therapy. N Engl J Med, 2017, 377(22):2167-2179.
[2] Zeiser R.,B. R. Blazar. Pathophysiology of Chronic Graft-versus-Host Disease and Therapeutic Targets. N Engl J Med, 2017, 377(26):2565-2579.
[3] 王三斌, et al. 小鼠同種異體骨髓移植GVHD模型的建立.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理, 2006, 23(2):10-13.
[4] Wu X., et al. IL-21 accelerates xenogeneic graft-versus-host disease correlated with increased B-cell proliferation. Protein Cell, 2013, 4(11):863-71.
[5] Filipovich A. H., et al. National Institutes of Health consensus development project on criteria for clinical trials in chronic graft-versus-host disease: I. Diagnosis and staging working group report. Biol Blood Marrow Transplant, 2005, 11(12):945-56.
[6] Jagasia M. H., et al. National Institutes of Health Consensus Development Project on Criteria for Clinical Trials in Chronic Graft-versus-Host Disease: I. The 2014 Diagnosis and Staging Working Group report. Biol Blood Marrow Transplant, 2015, 21(3):389-401 e1.
[7] 黃欣, et al. miHA不合異基因骨髓移植后慢性移植物抗宿主病小鼠模型的建立.國際輸血及血液學(xué)雜志 2014, 37(2):97-101.
[8] 吳遠(yuǎn)彬, et al. 單倍體供者淋巴細(xì)胞輸注誘導(dǎo)慢性移植物抗宿主病小鼠模型的建立.中華器官移植雜志, 2017, 38(12):729-733.