動物性別

雄性

動物周齡

250-300g

造模方法

1.  麻醉、消毒、固定。

2.  用肝素預潤過的針簡抽取0.2 ml血液。

3.  將大鼠頭部固定在立體定位注射儀上,在頭皮的中線上做一個2cm矢狀切口。

4.  在前鹵0.1mm、右4 mm處做好鉆孔記號，確保孔洞在冠狀縫。

5.  用鉆頭在標記處垂直鉆孔，注意不要損傷硬膜。把 0.2 ml未肝素化的血液裝入針簡，并把針的斜面放置于中線相反的方向,針尖插入腦組織直至針尖消失。

6.  針垂直插入右側尾狀核 5.5 mm。把 100自體全血以10 l/min 的速度灌入右側基底節區,結束后針頭繼續留置2 min。

7.  緩慢退針，填抹骨蠟并縫合皮膚。

成模鑒定

1.  實驗動物一般情況觀察

2.  放置測試

3.  轉角試驗

4.  腦水容量：腦水腫和腦出血的患者生存率有很大關系,故需要檢測腦水腫的形成。腦水腫主要采用干濕重法檢測。

5.  血腦屏障通透性：常用檢測方法是熒光同位素和伊文思藍(Evans blue)染色DAB染色法做 IgG染色也可以檢測血腦屏障的通透性。

6.  腦基因組學：確定基因表達的變化。

7.  組織學：評估出血量、出血位置和范圍神經細胞死亡情況和腦萎縮情況

造模周期

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后續檢測指標建議

1.  腦水容量：腦水腫和腦出血的患者生存率有很大關系,故需要檢測腦水腫的形成。腦水腫主要采用干濕重法檢測。

2.  血腦屏障通透性：常用檢測方法是熒光同位素和伊文思藍(Evans blue)染色DAB染色法做 IgG染色也可以檢測血腦屏障的通透性。

3.  腦基因組學：確定基因表達的變化。

4.  組織學：評估出血量、出血位置和范圍神經細胞死亡情況和腦萎縮情況

5.  腦組織HE染色

注意事項

1.  造模后大鼠予以單籠喂養，注意保溫、保暖.若造模中或造模后大鼠死亡導致無法收集到該組實驗所需的數據時，按照相同的隨機原則選用備用的大鼠替代。整個實驗選用大鼠共57只，其中死亡12只，納入實驗數據大鼠45只。

2.  標本的獲取：每組在預定的時間點((1天、3天、5天)，大鼠麻醉成功后，仰臥位，沿腹部中線，組織剪依次剪開皮膚，鈍行分離皮下組織，剪開腹部肌肉、腹膜，鈍性分離下腔靜脈，用一次性靜脈采血針抽取3m1靜脈血，室溫放置2小時，置于離心機中，2-8攝氏度， 1000r/min、離心15分鐘，取上層血清分裝于防凍管中，置于一20°C的冰箱中保存，待檢測。

3.  腦組織取材：采血后立即用止血鉗夾閉下腔靜脈及腹主動脈，繼續沿腹中線向上剪至劍突，剪開隔肌，沿胸骨旁開2cm分別剪開兩側肋骨，組織鉗提取胸骨向上固定，充分暴露心臟，用連接輸液器的注射針插入左心室尖部，快速滴注生理鹽水，同時眼科剪剪開右心耳，持續灌注，先快后滿，至大鼠眼球變白、上爪變白、右心耳灌注也變清亮時停止灌注。迅速斷頭取腦，完整剝離腦組織，放入4%的多聚甲醛中浸泡48小時作病理檢測。

4.  溫度的影響：在缺血性腦損傷中，溫度的微小下降也會具有腦保護作用。這種情況同樣適用于腦出血模型。腦出血后自身體溫調節受到影響，實驗后期動物體溫會急劇下降，這種溫度上的變化會影響腦出血模型的結果。因此，顱骨溫控和肛門溫控是必要的，而且要在術后48h將動物飼養于溫控保溫箱內。

5.  性別的影響：在缺血性卒中模型中，雌性動物的行為分數以及腦梗死體積,相比雄性動物均大幅減少。在腦出血模型中，雌性動物相對于雄性行為學上恢復期短，腦血腫較小。在兩種模型中，雌性的神經保護作用可能是循環中的雌性激索和黃體酮，因此實驗中常選擇雄性動物。

6.  手術過程中的出血問題：在手術過程中若遇到出血問題，可以用止血綿和骨蠟止血

7.  注射速度的快慢：與之前模型中快速注射相反的是,該模型使用了慢性注射法，將血液注入腦部軟組織。這種慢性注射限制了血液外滲進入蛛網膜下腔,從而逼真地模仿了自然的過程；此外，避免了對毗鄰組織產生生理性的壓力傷害

8.  使用自體還是供體的血液：腦水腫是腦出血研究的重點，腦部軟組織血腫會引發腦屏障破壞和水腫。在自體注血1~3d后，C57BL/6 小鼠的同側基礎神經節和皮質的腦部含水量顯著提高。有趣的是，有研究顯示,在腦部注血 1d 后，與自體血液相比，供體血液導致了更嚴重的腦部水腫。因此，可以利用供體血液模型進行腦水腫的進一步研究。