動物性別

雄性

動物周齡

250g左右

造模方法

大鼠飼養至體重350g以上開展實驗。

(1)麻醉：實驗動物用異氟烷氣麻。

(2)備皮：麻醉生效后，用電動剃毛器剃去實驗動物腹部以下所有毛發，術區嚴

格碘伏消毒，實驗動物仰臥固定于實驗臺，鋪一次性無菌巾；

(3)使用趾長屈肌腱進行前交叉韌帶重建，趾長屈肌腱分離：

a.同側肢體于腳踝內后側作一0.5cm小切口分離趾長屈肌腱近端(注意與脛骨后

肌腱相區別）；

b.用眼科鑷挑起趾長屈肌腱近端，當牽拉韌帶時大鼠腳趾將屈曲，以此證明分離

的是趾長屈肌腱，用4-0號縫線分離；

c.于足底大腳趾后內側作另一0.5cm小切口分離趾長屈肌腱遠端；

d.注意仔細與肌腱周圍血管分離，利于減少出血；

e.同樣當用眼科鑷挑起趾長屈肌腱遠端時大鼠腳趾將屈曲，此時用眼科剪或刀片

離斷肌腱;

f.再于腳踝內后側小切口牽拉4-0號縫線，將肌腱牽拉出來，再利用眼科鑷將肌

腱上的肌肉分離，利用止血鉗鉗夾肌腱遠端，可順利拉出肌腱；

(4)獲得的韌帶長度可達約4.0厘米(圖3—5)；剔除多余的肌肉組織后，用4-0號

縫線作為牽引線，打單結固定肌腱近端(近端更易于通過骨隧道)，將準備好的肌腱浸泡于含抗生素的生理鹽水中，備用；

3.2大鼠前交叉韌帶重建模型的建立

(1)于大鼠膝關節髕骨內側緣作一約1.5厘米縱行切口；逐層切開皮膚，用眼科剪延長切口并分離皮下組織及關節囊，屈曲膝關節，充分暴露前交叉韌帶，用剪刀剪斷韌帶；

(2)以直徑1.5mm的克氏針分別以正常前交叉韌帶脛骨和股骨附著點為標志，鉆取脛骨和股骨隧道，電鉆打孔時注意滴加生理鹽水降溫；

(3)用直針引導肌腱近端牽引線，將趾長屈肌腱自下骨道外口穿經脛骨和股骨骨

隧道引出；

(4)使用4-0號縫線8字縫合法，將移植物固定于股骨近端和脛骨遠端隧道口周

圍的骨膜或其他軟組織；

(5)  用注射器抽取含抗生素生理鹽水，仔細止血、充分沖洗膝關節腔后，復位髕骨，用6-0號縫線逐層縫合關節囊、皮膚(細縫線有利于減少對皮膚刺激，降低動物啃咬縫線)，碘伏涂抹傷口；

(6)  術后籠養，自由活動，術后前三天，每天給大鼠膝關節傷口換藥，前3天給予肌注青霉素(8U/kg)抗感染，另外還要定期通過敲打鼠籠的方式，來增加術后 大鼠活動量，以防止術后膝關節粘連情況的發生。

成模鑒定

取材：術后4周，將大鼠處死，完整取下大鼠術側下肢的脛骨和股骨，剔除周圍皮膚肌肉和軟組織，保留關節內外移植物，取下股骨-韌帶-脛骨復合體，10%福爾馬林固定，室溫保存。

(1) MircoCT檢測：用于測量骨隧道直徑變化、隧道內新形成組織的礦化程度、密度和骨隧道周圍骨質變化；

(2) 病理組織學檢查：做完Micro CT，組織脫鈣，修整標本，分別留取近膝關節處脛骨和股骨各1cm，做石蠟包埋和切片，HE染色，光鏡下主要觀察骨隧道與移植肌腱結合部的交界組織的病理改變。

造模周期

5周

后續檢測指標建議

生物力學檢測（載荷拉伸）

a.小心剔除膝關節中除重建的前交叉韌帶之外的所有肌肉，軟組織和韌帶，解除重建韌帶兩端固定縫線避免影響生物力學檢測；

b. 測試儀行生物力學檢測，將股骨-肌腱-脛骨復合體置于試驗夾具中進行最大載荷拉伸試驗，詳細觀察并記錄將重建的前交叉韌帶從股骨或脛骨的骨隧道中拉出或將韌帶拉斷的最大加載負荷，并計算其剛度。

備注

文獻中很多用大動物造模