慢病毒（Lentivirus）是逆轉錄病毒的一種，它能夠將靶基因導入到一些較難轉染的細胞，如原代細胞等，并且將靶基因隨機整合到宿主的基因組中，從而大大增加了轉染效率，并且能夠在細胞系中穩定表達若干代，可以進行穩轉細胞株的篩選。

慢病毒表達載體包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。

一、什么叫質粒

質粒(Plasmid)是附加到細胞中的非細胞的染色體或核區DNA原有的能夠自主復制的較小的DNA分子；一般來說，質粒的存在與否對宿主細胞生存沒有決定性的作用；它是基因工程最常見的運載體。

根據它們所帶有的基因和賦于宿主細胞的特點分為六種不同的類型：

二、什么叫慢病毒載體

 慢病毒載體，指以人類免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 來源的一種病毒基因治療載體。區別一般的逆轉錄病毒載體，它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。慢病毒載體直接用于宿主細胞的感染，目的基因進入到宿主細胞之后，經過反轉錄，整合到基因組，從而高水平地表達效應分子。

三、質粒的構建

四、慢病毒載體構建及包裝流程

慢病毒包裝系統包括：2個包裝質粒以及1個轉移質粒，將這些質粒共轉染包裝細胞。2個包裝質粒分別為：Gag/Pol表達質粒和Rev表達質粒。

1、慢病毒過表達質粒載體的構建

設計上下游特異性擴增引物，同時引入酶切位點，PCR從模板（CDNA質粒或者文庫）中調取目的基因CDS區，連入T載體；將CDS區從T載體上切下，裝入慢病毒過表達質粒載體。

2、慢病毒干擾質粒載體的構建

合成siRNA對應的DNA頸環結構，退火后連入慢病毒干擾質粒載體

3、慢病毒載體的包裝與濃縮純化

制備慢病毒穿梭質粒及其輔助包裝原件載體質粒，4種質粒載體分別進行高純度無內毒素抽提，共轉染293T細胞，轉染后18h 更換為完全培養基，換液30h后，收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，病毒上清液通過超離心濃縮病毒。

五、質粒、慢病毒的應用

質粒的應用：

1、應用于基因治療，如質粒DNA基因治療藥物（以質粒DNA為載體的基因治療產品）；2、外源基因的表達；3、基因工程：①微生物基因工程；②植物基因工程；③動物基因工程。

慢病毒的應用：

1、獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的基因治療；2、神經系統疾病的基因治療；3、血液系統疾病的基因治療；
本期知識分享就到這啦，歡迎大家在評論區討論，留言您想了解的話題或相關知識。更多技術服務可咨詢：0755-86325431，拓普生物竭誠為您服務。