WHO、GIobcan 2020統計報道2020年肺癌新發病例2206771例,占比約11.4%,是2020年癌癥病發率的第二位,而肺癌死亡病例為1796144例,占比約18%,病死率排第一位。盡管手術、放療、化療和靶向治療取得了很大進展,但由于在診斷時大多數患者已局部晚期或出現轉移,預后仍然較差,5年生存率僅為15%!。醫學動物實驗是基礎實驗研究的重要組成部分,更是臨床實驗及治療的理論依據和基礎。
本期我們將分享小鼠肺原位注射相關知識:
一、肺部解剖
肺原位注射用于肺局部給藥和腫瘤細胞種植。
小鼠左肺僅有1葉,右肺有4葉,分為右前葉、右中葉、右后葉和較小的腔后葉。因此,進行局部給藥和腫瘤細胞種植時通常選擇左肺。
小鼠左肺側位體表位置:冠狀面在左肩關節水平線以下,橫截面以左上臂后緣為中心。
二、注射所需器械與耗材
器械與耗材:
(1)29G胰島素注射器
(2)標尺
(3)眼科剪
(4)眼科鑷
(5)細胞染色液
三、操作方法
(1)距離針尖5mm處,將針頭彎曲約90°;
(2)將小鼠麻醉,然后右側臥固定,備皮消毒;
(3)于腋中線上、肋緣和肩鎖關節中間部位,將皮膚作1cm開口;
(4)鈍性分離皮下組織,明顯可見左肺輪廓;
(5)注射器中吸入20-50ul細胞混懸液;
(6)將胰島素注射器針頭完全垂直通過肋間刺入肺中;
(7)注射細胞,靜止數秒后拔針;
(8)閉合創口,消毒,待小鼠蘇醒。
四、結果展示
分別注射25ul和50ul染色液,注射后解剖可見肺部明顯液體蓄積。
五、注意事項
(1)注意針頭不刻意下壓,以免貫通左肺肺葉;
(2)由圖可見,注射量不宜超過50ul,為了保證注射物可以局限在左肺葉內,應適當降低注射量;
(3)小鼠周齡也是影響注射量的原因之一。
六、常見模型案例
小鼠原位肺癌模型構建:選擇C57BL/6小鼠,6~8周,雌性,體重約22g。LLC細胞計數板計數及配制2×107個/ML,LLC細胞無血清懸液0.2ML,在 SPF 級手術間操作,腹腔注射濃度為4%的水合氯醛溶液麻醉(麻醉用量為小鼠體重的1%),小鼠右側臥位,定位于小鼠左側腋下以碘伏消毒并備皮,再次消毒后行1cm切口,鈍性分 離 至 肋 骨 表 面,可 見 明 顯 呼 吸 及 肺 臟 活動,在肋骨上緣1ml注射器垂直穿刺約3mm,緩慢注射細胞懸液約50μl并停留3~5s迅速拔針,觀察數秒是否氣胸形成,呼吸如常,碘伏再次消毒以細絲線單純間斷縫合2針。
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