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節前再學習一波!細胞培養之支原體檢測

發布時間:2024-04-19
當培養中的細胞生長緩慢,漂浮物增多時就有必要做支原體檢測。對于珍貴的細胞可以做到早發現,早搶救!
  • 支原體簡介

  1. 何為支原體:支原體是目前發現的最小的最簡單的原核生物,直徑50-300nm,基因數量為480,wei一可見的細胞器只有核糖體。于1898年Nocard等發現并命名,不僅能在無生命的人工培養基上生長繁殖,能通過細菌濾器。

  2. 支原體分布支原體存在于我們身體很多地方,如眼睛,鼻孔,肛門,口腔,陰道等都存在支原體。


  • 支原體對細胞的影響

粘附于宿主細胞表面的支原體從細胞吸收營養,從細胞膜獲得膽固醇等脂質,引起細胞損傷。在細胞培養中大多細胞表現為分泌物增多、細胞破碎、生長緩慢,嚴重者導致細胞死亡
此外,支原體代謝產生的有毒物質,如溶神經支原體能產生神經毒素,引起細胞膜損傷;有的支原體含有尿素酶,可以水解尿素產生大量氨,對細胞有毒害作用。
當培養中的細胞生長緩慢,漂浮物增多時就有必要做支原體檢測。對于珍貴的細胞可以做到早發現,早搶救

圖1:支原體污染嚴重,導致細胞死亡


三、支原體檢測步驟
1、試劑與耗材:包括引物、DNA聚合酶、去離子水、移液器頭、PCR管
2、模板:細胞培養48 h后的培養基沸水浴10min,取上清即可
3、PCR擴增:將反應體系配好混勻,選擇合適的程序進行擴增。
4、瓊脂糖糖凝膠電泳(如下圖)
陰性,DNA條帶出現;
陽性,引物1有大小約187 bp的DNA條帶出現;引物2有大小約205bp的DNA條帶出現


靈賦拓普支原體檢測優勢
(1)精準:采用經典的PCR法,能夠檢測極微量的樣品,并且條帶單一,清晰無雜帶;
(2)檢測范圍廣:我們采用2對引物分別來檢測,可檢測二百多種支原體,涵蓋細胞培養遇見的所有常見種類;
(3)高效:收到樣品2天內即可出具實驗報告。