想必做過繁育課題的科研人都會思考：怎樣提高小鼠的繁育成功率？答案是在小鼠動情期合籠，成功率最高。本文將帶您深入探秘小鼠動情周期，并分享實操經驗。

一、小鼠動情周期解析

什么是小鼠動情周期？

小鼠動情周期是雌性小鼠生殖系統的周期性變化，通常持續 4 - 5 天，包括卵泡發育、排卵和子宮內膜準備等過程，受雌激素和孕激素等內分泌激素調控，與人類月經周期類似。

二、動情周期區分方法

1、生殖器官外觀：小鼠生殖器官在不同動情周期階段有變化，如子宮顏色和大小、卵巢大小等，但觀察需解剖小鼠，會造成傷害。

2、行為特征：小鼠在動情周期不同階段行為有差異，如活動性增加、尿液標記物變化等，但觀察較主觀，結果準確性欠佳。

3、陰道細胞涂片：通過取小鼠陰道內細胞涂片，觀察陰道上皮細胞形態變化確定動情周期階段。動情周期不同階段，陰道細胞形態會改變，如核的形狀和大小。

三、陰道細胞涂片實操經驗

那接下來分享一些做陰道細胞涂片的寶貴經驗：

（一）實驗準備

載玻片、棉球、棉棒、顯微鑷、生理鹽水、福爾馬林、瑞氏 - 吉姆薩染液、純水、中性樹脂、顯微鏡、蓋玻片。

（二）涂片制作

1、用顯微鑷卷米粒大小棉絮，沾濕生理鹽水，插入小鼠陰道口 0.5 - 1cm，貼陰道壁從里往外刮 10 次（大鼠用棉棒，且保持每只鼠力度與次數一致）。

2、將鑷子棉球放玻片中央正上空，滴加生理鹽水至有液滴掛在棉球但不掉落，慢慢轉動棉棒使細胞盡量多洗進液滴。

3、將液滴從玻片中央往四周平鋪（棉棒不觸玻片，防細胞破裂），自然風干。

（三）涂片固定

在光下轉動玻片，觀察涂片剛好風干后（風干太久細胞破裂影響后續），放入 4% 多聚甲醛固定 10min，用純水洗凈殘留固定液。

（四）涂片染色

配置染液前與滴加染液前充分搖勻，盡量甩干玻片殘留水分，從旁邊滴加染液，用 tip 頭鋪平（勿觸玻片），避光常溫孵育 10min（可回收染液，以備復染），清水洗凈，鏡下觀察。

（五）封片

鏡下觀察，若細胞均勻、背景干凈無雜質、上色程度理想，即可封片。在玻片中央滴加中性樹脂后蓋蓋玻片，平放靜置過夜后放切片盒保存。

四、依據涂片區分動情期

陰道脫落細胞主要有白細胞、有核上皮細胞、角化細胞 3 種。

1、動情前期：涂片大部分是有核上皮細胞，偶有少量角化細胞。

2、動情期：隨著卵泡加速生長，有核上皮細胞逐漸轉化成成熟無核角化細胞，此時全部是無核角化細胞或間有少量上皮細胞。

3、動情后期：隨即開始出現白細胞，無核角化細胞慢慢減少，出現 3 種細胞（白細胞、角化細胞、有核上皮細胞）同時存在的現象。

4、動情間期：隨后，角化細胞不斷減少，白細胞不斷增多，轉化為以白細胞為主，逐漸進入動情間期；通常見到以角化細胞為主則認為進入動情期。

以下便是我們技術員辛勤勞作的結果，供大家參考：

五、陰道涂片在疾病模型研究中的應用

陰道涂片不僅是小鼠動情周期區分的重要實驗手段，還廣泛應用于多種疾病模型的研究，幫助研究者更好地理解疾病的發生機制和評估藥物的治療效果。下面就來看看陰道涂片如何與以下幾個常見疾病模型相關聯。

1、大鼠子宮腺肌癥模型（他莫昔芬乳鼠滴喂誘導）：子宮腺肌癥是指子宮內膜組織在子宮肌層內生長，形成腺體和基質，與雌激素水平相關。陰道涂片可評估激素效應，幫助了解病理進展和激素治療效果。

· 應用： 通過陰道涂片觀察大鼠在不同激素處理下的動情周期變化，研究人員可以更清楚地了解到激素如何促使子宮腺肌癥的發生。尤其是在研究雌激素對內膜樣組織生長的影響時，陰道涂片的結果能夠為激素治療的效果提供參考，幫助評估治療方案的療效。

2、卵巢早衰模型（環磷酰胺腹腔注射誘導）：卵巢早衰（Premature Ovarian Failure, POF）指的是卵巢功能提前喪失，會導致動情周期紊亂，陰道涂片可監測動情周期變化，評估卵巢功能衰退和激素水平變化，探討治療手段的干預效果。

· 應用： 陰道涂片在卵巢早衰模型中的應用主要體現在監測動情周期的變化。卵巢早衰后，動情周期可能發生紊亂，陰道涂片通過觀察上皮細胞的變化，能夠幫助研究人員評估卵巢功能的衰退以及激素水平的變化，進一步探討不同治療手段（如激素替代治療）對卵巢早衰的干預效果。

3、多囊卵巢綜合征（PCOS）模型（來曲唑灌胃誘導）：PCOS 表現為內分泌紊亂，陰道涂片可觀察動情周期變化，評估卵巢功能紊亂和藥物治療效果。

· 應用： 在PCOS動物模型中，陰道涂片實驗用于觀察不同階段的動情周期變化，特別是雌激素與雄激素的相對水平。陰道涂片能夠幫助評估高雄激素狀態下卵巢功能的紊亂，且通過細胞形態學變化，能夠揭示多囊卵巢的特征性表現。此技術還能評估藥物對PCOS治療的效果，特別是在調節激素平衡和恢復正常排卵方面的作用。

4、子宮內膜異位癥模型（手術移植造模）：陰道涂片可研究內膜異位癥發病機制，評估激素治療對抑制內膜異位癥的療效。

子宮內膜異位癥是指子宮內膜組織在子宮腔外的異常生長，通常出現在卵巢、腹腔等部位。該疾病的動物模型通常通過移植異位內膜組織或高雌激素環境誘導。

· 應用： 陰道涂片在子宮內膜異位癥模型中的應用主要集中在研究內膜異位癥的發病機制。通過觀察動情周期的變化，特別是在高雌激素的影響下，陰道涂片能夠反映激素水平對子宮內膜異位癥病變的影響。研究人員通過分析涂片結果，可以評估激素治療（如雌激素受體拮抗劑）對抑制內膜異位癥的療效，為臨床治療提供數據支持。

六、總結

陰道涂片是研究動情周期和多種疾病模型的重要工具，也是多種疾病模型（如子宮腺肌癥、卵巢早衰、多囊卵巢綜合征、子宮內膜異位癥等）的實驗基礎。通過觀察動情周期，能深入探討激素在疾病中的作用機制，評估治療效果，為臨床應用提供參考。作為簡單有效的實驗技術，其在疾病研究中作用重大，助力我們更好理解生殖生理和相關疾病的發生發展。

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