由于免疫組化染色過程中存在很多步驟或環節，每一個步驟或環節都可能影響到染色的最終結果，因此，要做好一張高質量的免疫組化切片并不是一件非常容易的事，下面總結了幾點小問題，希望能給到幫助。

組織取材要快，不宜過大，太大太厚的組織不利于均勻一致的固定，取材厚度應小于5mm，避免人為損傷。

固定的目的是①防止標本從玻片上脫落；②除去防礙抗原-抗體結合的類脂，使抗原抗體結合物易于獲得良好的染色結果；③固定的標本易于保存。組織取材后應即刻固定，常用固定液有中性甲醛、4%多聚甲醛（推薦使用），固定體積10倍于組織，固定時間6-24小時，固定時間不夠或過長，都有可能引起抗原丟失。

切片的質量關系著免疫組化染色好壞，保持切出的組織完整、平整，切片皺褶、邊緣卷曲會造成之后試劑難以洗凈，顯色時這些區域著色會增強。

三級二甲苯脫蠟，每次脫蠟15分鐘，脫蠟徹底，二甲苯使用次數不宜太多，每100張片子更換一次（每周更換一次也是可以的）。

由于組織中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定過程中，發生了蛋白之間交聯及醛基的封閉作用，從而失去抗原性；通過抗原修復，使得細胞內抗原決定族重新暴露，提高抗原檢測率。修復方法有酶修復、高壓熱修復、微波熱修復，不同抗原有各自最適的修復方式，對大多數的抗原來說微波熱修復都能得到很好的效果。對于修復液大多數使用PH6.0的檸檬酸鈉修復液，但大多數的抗體使用EDTA（PH8.0或9.0）修復液效果好于PH6.0的檸檬酸鈉修復液

一抗孵育條件在免疫組化反應中最重要，包括孵育時間、溫度和抗體濃度。一抗孵育溫度有幾種： 4 度、室溫、37 度，其中 4 度效果最佳；孵育時間：這與溫度、抗體濃度有關，一般 37 度 1-2h，4 度過夜（從冰箱拿出后 37 度復溫 45min） 。具體條件還要摸索。二抗孵育條件：二抗一般室溫或 37 度 30min-1h，具體時間需要摸索......

顯色液應現配現用，肉眼或顯微鏡下觀察，當有明顯棕色出現，應終止顯色，顯色時間不宜過長造成背景染色。