新型冠狀病毒（2019-nCoV）是冠狀病毒，由RNA核酸和蛋白等組成，RNA很容易降解，蛋白衣殼將RNA包裹在其中，加上一層由脂質(zhì)和糖蛋白組成的包膜外衣，從而使其RNA得到保護。病毒通過特定細胞表面的受體入侵細胞造成感染，并且利用宿主細胞進行復(fù)制增殖。冠狀病毒亞科分為α、β、γ和δ四個屬，新型冠狀病毒屬于β屬。新型冠狀病毒與中東呼吸綜合征相關(guān)冠狀病毒MERSr-Cov、嚴重急性呼吸綜合征相關(guān)冠狀病毒SARSr-Cov一樣，都會引起上呼吸道感染，可引起肺炎、甚至重癥肺炎，且可人傳人。

圖片來源：美國衛(wèi)生研究院（NIH）官網(wǎng)

中國科學(xué)院武漢病毒研究所石正麗團隊從早期的5位患者樣本中獲得了該病毒的全基因組序列。從支氣管肺泡灌洗液(BALF)中收集五個重癥患者的樣本(WIV04)，采用測序NGS的宏基因組學(xué)分析方法，在1038758個總讀長或人類基因組篩選獲得的1582個總讀長中，有1378個(87.1%)序列與SARSr-CoV匹配(圖2a)。該病毒基因組由冠狀病毒常見的6個主要開放閱讀框(ORFs)和一些其他輔助基因組成(圖2b)。

圖2來源：Peng Zhou，Zheng-Li Shi，et al.

目前新型冠狀病毒的常規(guī)檢測方法為核酸檢測：實時熒光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）方法。其檢測原理為：一條RNA鏈逆轉(zhuǎn)錄成為互補DNA，再以此為模板通過PCR進行DNA片段擴增，再通過熒光探測來標定擴增的DNA片段是否存在。該方法能夠檢測細胞中的RNA病毒的含量。我國國家衛(wèi)健委提出的針對新型冠狀病毒的檢測標準，需要對病毒的多個保守目標序列上的兩個目標靶點（ORFlab、N）均進行擴增檢測，只有當兩個都顯示陽性了，才能確診。

根據(jù)專家介紹，從現(xiàn)在的情況看，根據(jù)收集到的病毒樣本都是相同的，并沒有出現(xiàn)變異的情況。

從原理上來看，RT-qPCR是能夠直接快速從人體中找出是否存在新冠狀病毒RNA序列。我國在檢測過程中選用的是多個保守目標序列，即不容易發(fā)生變異的學(xué)歷片段上的靶點。

核酸檢測方法的最大特點是特異性高、靈敏度高，但最大的弱點是易受污染影響。樣本采集的時間，方法以及處理均會對檢測結(jié)果有影響。

根據(jù)中國國家衛(wèi)健委頒布的《新型冠狀病毒實驗室檢測技術(shù)指南》，采集標本的種類里有上呼吸道標本（咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物），下呼吸道標本（深咳痰液、呼吸道抽取物、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液、肺組織活檢標本），血液標本，血清標本，后來又增加了糞便、肛拭子。而在實際操作中，采取最多的是咽拭子、鼻拭子之類的上呼吸道標本。一些特定的疑似感染的患者，不同的病期，在不同的身體部位出現(xiàn)病毒的濃度會有差異，如咽部沒有，但可能糞便中有。因此會出現(xiàn)“假陰性”的結(jié)果。

采集時讓患者張大嘴后用特制棉簽或小刷頭刮取其咽部采集帶病毒標本。如果平時醫(yī)護人員咽拭子取樣不多，刮取標本時患者的反應(yīng)又比較大，往往導(dǎo)致刮取標本的位置不對，或力度和時間不夠，沒有刮取到帶病毒的標本或刮取到的帶病毒標本量少，最后導(dǎo)致檢測結(jié)果陰性。

一旦在實現(xiàn)過程中操作不當，出現(xiàn)污染，如RNA酶污染，則會直接影響檢測結(jié)果。此外對樣本的處理保存也有嚴格的標準。2019-nCoV為RNA病毒，很容易被外源性或細胞破壞后所釋放的RNA酶降解，而影響最后的檢測效率。建議標本采集后及時送檢，及時檢測（4小時）。如因某些原因標本采集后不能及時送檢或及時檢測，應(yīng)將其置保存：4℃，＜24小時； -70℃以下，≥24小時；并且避免反復(fù)凍融。

還有一種可能性，檢測本身是準確的，只是這些患者在做前幾次檢測的時候還沒有感染。然而，隨著時間進程，他們后來被感染了，最終檢測結(jié)果呈陽性，確診。

對于新冠病毒的核酸檢測，無論是在規(guī)范樣本采集還是提高試劑檢測靈敏度等等方面，都是需要完善的。核酸檢測仍是當前最準確和靈敏的新冠病毒檢測方法。專家指出，對高度懷疑的有流行病學(xué)史的病例，還是要多次采樣，此外還應(yīng)該根據(jù)病人在臨床上的癥狀、體征等情況以及CT影像等其他檢測結(jié)果來綜合判斷。

總之，病毒沒有出現(xiàn)變異，疑似患者首先要做的仍舊是及時隔離，接受檢查。面對疫情，我們自身要做好防護工作，勤洗手，多通風，出門戴口罩，不信謠，不傳謠！沒有一個冬天不會逾越，沒有一個春天不會到來，中國加油！

參考文獻：

[1]Zhou P,Zhou P, Yang XL, et al.Wang XGPneumoniaoutbreak is associated with a novel coronavirus of likely bat origin.Nature.2020 Feb 3. doi: 10.1038/s41586-020-2012-7.

[2]國家衛(wèi)健委