人工脫水包埋
現實生活里有不少單位是不愿投資購買屬于單位的自動脫水包埋機,一是該儀器的價格問題,二是單位不是經常有脫水包埋的需求,三是脫水包埋機的保養維護成本問題。那么人工脫水包埋在這種情況下就成了救星,它的主要優勢是道具常見,操作簡單,試劑耗材可長期使用,成本門檻低。
不管什么情況,本章內容將會介紹出一個純屬人工對組織樣品進行石蠟脫水包埋的實驗步驟經驗分享。
實驗流程
1、取樣(本章內容適合普通組織,不包括骨頭等組織)
2、多聚甲醛固定(12h以上)
3、石蠟包埋盒上寫好標記,放入對應組織樣品
4、流水沖洗15min(去掉組織表面的固定液)
5、脫水
不同組織具體脫水時間如下:(僅供參考)
80%酒精 | 95%酒精① | 95%酒精② | 100%酒精① | 100%酒精② | |
心 | 40min | 20min | 20min | 7min | 7min |
肝 | 20min | 10min | 8min | 5min | 5min |
脾 | 10min | 7min | 7min | ||
肺 | 30min | 20min | 20min | 10min | 10min |
腎 | |||||
血管 | 20min | 20min | 20min | 10min | 10min |
脂肪 | 30min | 20min | 10min | 5min | 3min |
注意:該步驟是關鍵步驟,脫水過度會造成后期石蠟切片失敗,第一缸100%酒精過后要迅速甩干放進第二缸100%酒精進行繼續脫水,脫水成功的表現是用手輕捏組織像似捏剛成熟的獼猴桃
6、ortho-xylene組織透明
ortho-xylene① | ortho-xylene② | |
心 | 5min | 5min |
肝 | ||
脾 | 7min | 7min |
肺 | ||
腎 | ||
血管 | 10min | 10min |
脂肪 | 5min | 5min |
注意:該步驟是關鍵步驟,透明過度會造成后期石蠟切片失敗,第一缸ortho-xylene過后要迅速甩干放進第二缸ortho-xylene進行繼續透明,該步驟不宜停頓,因為試劑會持續反應。
7、浸蠟烘箱調到60°提前3H融蠟,烘箱內放三杠2L大的鐵缸作為組織浸蠟的步驟
蠟缸① | 蠟缸② | 蠟缸③ | |
心 | 40min | 1h | 1h |
肝 | |||
脾 | |||
肺 | |||
腎 | |||
血管 | 40min | 40min | |
脂肪 | 30min |
注意:該步驟中,盡量將組織的ortho-xylene甩干再放進第一缸蠟缸進行浸蠟環節,而且每缸放樣浸蠟的前一分鐘用長鑷子攪拌包埋盒,使蠟充分融進包埋盒里面浸到組織
8、包埋機包埋
9、冷凍臺凝固蠟塊組織