簡述眼球結構：

眼是一個可以感知光線的器官。眼睛通過把光投射到對光敏感的視網膜成像，在那里，光線被接受并轉化成信號并通過視神經傳遞到腦部。通常眼睛是球狀的，當中充滿透明的凝膠狀的物質，有一個聚焦用的晶狀體，通常還有一個可以控制進入眼睛光線多少的虹膜。眼球壁主要分為外、中、內三層。

外層是纖維膜，由角膜、鞏膜組成。角膜含豐富的神經，感覺敏銳。角膜除了是光線進入眼內和折射成像的主要結構外，也起保護作用，并是測定人體知覺的重要部位。鞏膜為致密的膠原纖維結構，不透明，呈乳白色，質地堅韌。

中層又稱葡萄膜，色素膜，具有豐富的色素和血管，包括虹膜、睫狀體和脈絡膜三部分。

內層為視網膜，是一層透明的膜，也是視覺形成的神經信息傳遞的第一站，具有很精細的網絡結構及豐富的代謝和生理功能。

眼內腔：包括前房、后房和玻璃體腔。眼內容物包括房水、晶體和玻璃體。三者均透明的，與角膜一起共稱為屈光介質。玻璃體有屈光作用，也起支撐視網膜的作用。

 （小鼠眼球結構，插圖來源：中國科學院上海生命科學研究院神經科學研究）

眼球注射作用：

小鼠眼球結構（圖片來源：網絡搜集）

眼球作為相對獨立的器官，球內注射是最有效的藥物遞送方式。眼球注射可突破血眼屏障,使藥物迅速濃集于眼內, 繼而在眼內擴散到達作用部位。

具有代表性的眼內注射給藥途徑有視網膜下(subretinal)注射和玻璃體腔(Intravitreal)注射，玻璃體內注射能夠使基因藥物可以較快擴散至視網膜或脈絡膜部位，如臨床上常用于老年性黃斑變性的藥物輸送；視網膜下注射可將藥物直接傳遞到視網膜和視網膜色素上皮細胞(RPE)之間的潛在空間，是將藥物直接遞送至RPE細胞的最佳方法。

實驗步驟：

實驗器械及耗材：吸入式麻醉機、Hamilton注射器(30G、33G)、托品酰胺、去氧腎上腺素、手術顯微鏡

實驗大體分為：麻醉-擴瞳-預切口-注射

麻醉：

1. 小鼠置于誘導盒內進行吸入式異氟烷麻醉，捏合小鼠腳指確認是否麻醉完全;

2. 將老鼠轉移到解剖顯微鏡下，連接鼻錐持續給予異氟烷;

3. 待注射眼睛滴加一滴丙美卡因(或類似的表面麻醉劑)防止注射引起局部反射，輕觸結膜確定麻醉深度；

擴瞳:

1. 傾斜鼠標頭部，使待注射眼睛在視野范圍內，用棉簽擦去任何多余的液體；

2. 向待注射眼球滴加1-2滴1%托品酰胺和0.5%去氧腎上腺素用于擴大瞳孔；

鞏膜切口（預切口）:

1. 使用鑷子在上下眼瞼之間滑動，使眼球從眼窩中伸出，暴露鞏膜;

2. 采用30G針頭在角鞏膜緣后面做一個小的鞏膜預切口(推薦小鼠可以用 ALCON 的 10-0 針做切口，非常整齊，33 G 的針進去水密非常好;也可以用破囊針;切口越整齊，與針越匹配，越不易滲漏)；

注射：

1. 用鑷子捏緊緣下約1mm處的結膜保持眼球穩定；

2. 將裝好注射液的33G注射針頭，相對視神經約60度角，從角鞏膜緣后預切口，插入約1mm進行玻璃體腔注射；操作注射器平穩注入適量液體，注意注射過程避免晃動引起額外的組織損傷；注射后停留針頭約30秒以防漏液，然后將針頭慢慢抽出，重新放置結膜，輕輕將眼睛放回眼窩，閉上眼瞼；如果需要雙側眼球注射，將另一面眼球轉到顯微鏡視野下重復上述步驟，注射后可在角膜和注射區域涂抹抗生素眼藥膏防止感染

注射示例（圖片來源：網絡搜集）

 圖注：注射前(左一)與注射后(右一)

注意事項：

眼球注射過程應確保動物眼睛一直濕潤，避免角膜干燥，可根據需要多次使用潤滑滴眼液；

注射過程應緩慢進行，避免速度過快造成液體從注射部位回流；

眼球注射前應充分擴瞳，建議雙眼散瞳，以防一眼出現意外時可以迅速換眼；瞳孔過小不易看清眼底，會降低注射成功率，同時瞳孔過小也是虹膜出血的主要原因；

角膜穿刺點靠近角鞏緣處為好，以免形成角膜白斑而影響后續動物實驗；

注射時針尖應垂直進入，隨后傾斜；小鼠眼球小且晶體球形，傾斜角度小會損傷晶體，大會扎上視網膜導致出血；需要注意晶狀體占據玻璃體腔的大部分，應小心避免刺穿晶狀體；

推注液體時應當控制速度，迅速推注取材時會發現視網膜散在出血點，可能干擾試驗結果；推針以后留針 0.5-1 min，迅速出針；

注射結束后需要檢查，若術中損傷視網膜血管會立刻出血，此刻建議剔除；術后若晶體變全白，2-3 h 后會全部恢復；若晶體損傷可在術中發現，術后會逐漸出現局限的混濁。

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