國際著名病理學家Karl Lennert曾經說過：“技術是病理學之母”。病理組織學屬于形態學檢驗，組織病理學是將病變組織制成厚約數微米的切片，經不同方法染色后用顯微鏡觀察其細微病變，對疾病做出病理學診斷。組織病理分析是檢驗大多數動物模型實驗成功與否的金標準。病理學基本檢驗技術包括組織固定、石蠟制片、蘇木素-伊紅染色及常用特殊染色技術。

“操千曲而后曉聲，觀千劍而后識器”，閱讀下文自測病理組織學知識你知多少~

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一、石蠟切片與冰凍切片

（一）石蠟切片制備流程

（二）冰凍切片制備流程

TIPS：石蠟切片和冰凍切片如何選擇?

1、冰凍切片優點制片時間短，時間快；缺點保存時間短；

2、石蠟切片對組織的形態保存比冰凍切片好,標本可以長期保存；

3、常規染色，組化優先推薦做石蠟切片；

4、免疫熒光推薦用冰凍切片 (石蠟有自發熒光)；

5、脂質染色、ROS染色、 ATP染色，膽固醇染色推薦做冰凍切片。

二、HE染色

蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡稱HE染色法 ，石蠟切片技術里常用的染色法之一 。HE染色法是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中最基本、使用最廣泛的技術方法。

圖注：拓普生物HE染色圖

圖注：HE染色實驗流程圖

HE染色過程可能出現問題：

1、HE染色最常見的紅藍失調

偏藍色：蘇木素染色過深，分化不夠；伊紅試劑過期；伊紅染色時間太短，分化過度。

偏紅色：蘇木素染色過淺，分化過度；組織固定不佳，細胞核不著色；脫蠟不徹底，蘇木素染不上；蘇木素氧化成熟不夠；伊紅染色過深，分化不足。

2、HE染色后出現的大白色斑塊或斑點

答：脫蠟前烤片溫度偏低，時間過短，蠟未完全融化；切片在脫蠟溶劑中停留時間過短；脫蠟溶劑使用太久，得更新。

3、細胞核染色過淺，顏色暗淡

答：切片在蘇木素染液中停留過短，或蘇木素過度氧化失效，或分化時間太長。對策：重新染色。將組織切片放入0.01%氫氧化鈉、0.5%氨水、飽和的碳酸氫鈉溶液、乙醇溶液，每個3-5min即可，接著重新染色。可以適當地組織的嗜堿性以增強核染色，如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中3h，自來水沖洗5-10min染色，或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中1h，自來水沖洗10min染色。

4、細胞核染色過深，胞漿著藍色

答：切片在蘇木素染液中停留過長；或切片太厚；或分化時間太短。這種情況首先鏡下看看切片厚度(最佳厚度1-2層細胞核)，要么重新染色，要么重新制片。

5、細胞核呈棕紅色改變

答：蘇木素染液過度氧化；或蘇木素染色后反藍不足導致。應該立即更換蘇木素染色液。或在流動自來水(一般自來水PH7.5-7.8)，或在稀釋的氨水溶液，或在0.2%碳酸氫鈉中適當浸泡，這些步驟均可一定程度地加強蘇木素染色后的反藍效果。

6、伊紅染色較淡

答：伊紅的PH改變了(PH可能已大于5)；或反藍液體未漂洗干凈，殘留后影響胞漿嗜酸性染色；或者切片太薄并且在隨后的脫水步驟停留過久。對策：檢查伊紅染色液PH，可采用乙酸調至4.6-5.0。根據以上提示，調整實驗步驟。

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三、免疫組化

免疫組化是應用抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及相對定量的研究，稱為免疫組織化學技術。

圖注：拓普生物免疫組化圖

圖注：免疫組化實驗流程圖

圖注：拓普生物其他染色圖

四、各類組織常見染色方法及指標

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