脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）是由高能量創傷引起脊柱骨折或脫位而導致的脊髓神經受損， 是一種致殘致死率較高的疾病。由于脊髓損傷后的病理、生理機制復雜，目前治療效果尚不理想，而要研究脊髓損傷機制及其治療方法，構建動物脊髓損傷模型至關重要。本文結合靈賦拓普生物大動物技術部豐富的實驗經驗，分享比格犬脊髓損傷模型建立與藥物驗證研究。

一、實驗材料
（1） 實驗動物：比格犬，10-14kg，雌性；

（2） 實驗藥品：舒泰50，丙泊酚，異氟烷，青霉素，痛立定；

二、實驗方案

模型建立與藥物干預

比格犬通過肌肉注射舒泰50進行麻醉，行氣管插管，術中2%異氟烷進行維持麻醉。動物采用正中俯臥位，固定四肢，對T10為中心的手術區域及周圍進行備皮消毒，鋪無菌中單，依次切開皮膚，筋膜，及韌帶，剝離附著于脊柱的肌肉，充分暴露椎板，然后進行椎板切除，暴露脊髓，造成脊髓壓迫，同時保持壓迫10min，形成重度脊髓損傷。在局部止血后，縫合肌肉和皮膚。等動物麻醉轉醒后單獨放入犬籠中。受試組分別在術后D1，D3，D5，D7，進行脊髓給藥治療干預。對照組無需干預治療。

術后護理

術后每日傷口換藥護理持續7d，抗生素5d預防感染，術后48h給予鎮痛藥。若手術后出現食欲不振，適當予以腸外營養，補充體液和能量。

每日進行大體狀況檢查，若出現排尿困難，則需要每天進行腹部按摩，促進排尿。必要時進行尿道留置導尿管。若出現便秘，排便困難等情況，則需要飼喂易消化的食物，必要時進行通便。其他臨床癥狀，積極對癥治療。

常規臨床體征觀察，造模后每日觀察其運動狀態、后肢有無疼痛放射、有無食欲、精神狀態、能否自主排尿、排便等臨床體征，并做好記錄。

三、模型評估

行為學評估

1) 步態評分標準

手術造模之前及PB-NPs干預之后于第1周，第2周，第3周，第5周，第8周，固定時間進行行為學評分，共計6次步態評分，每次保留原始實驗記錄，及視頻。每次評分時間為10分鐘/動物。每次3人獨立評分。

2) 本體感覺評價

將犬胸腹托起的同時把前肢或爪的背面輕輕地放在不滑的地面上。假如他們能立即恢 復肢體則視作正常評分為2；將爪復位但能看到一個時間延長期或很困難的做這樣被視作反應遲鈍評分為1；沒有反應的評分為0。 

3) 傷害險知覺評價

淺感覺可以通過刺激腳蹼來評價，深感覺可以通過刺激腳趾來評價。

4) 排尿功能評價

觀察排尿情況：若有自主排尿，記錄頻次、每日尿量；若無自主排尿，則需觀察排尿異常類型（尿潴留、尿失禁等），根據人工輔助排尿（手法排尿或導尿）情況記錄每日的頻次及尿量。此外每日還需觀察有無血尿、膿尿等情況并對癥處理。

影像學評價

造模前1d和造模后1d、20d、56d，安排MRI檢測， T1/T2序列掃描受損部位+泌尿系統（MRU：腎臟、膀胱、輸尿管），觀察脊髓硬膜內外的結構變化、神經水腫以及泌尿系統形態，術后20天和術后56天觀察瘢痕情況。

手術造模之前及手術后1w，2w，3w，5w，8w各一次進行腹部超聲檢測，測量膀胱大小及殘余尿量等；各行一次尿流動力學檢查，評價膀胱排尿功能（包括最大膀胱容量、膀胱最大排尿壓力、膀胱漏尿點壓及膀胱順應性等）。

1）電信號采集

造模前1d和造模后1d、20d、56d，進行肌電波檢測1次，通過保定器固定，對四肢進行電刺激（3mA、5mA、7mA），記錄肌電信號，評估造模效果。

2）血液學檢查

造模前1d和造模后1d、7d、28d、56d，采集5ml血液（非麻醉狀態）進行血生化、血常規檢測。每個時間點，每只動物再取2ml無抗凝全血，分離血清，分別用凍存管凍存在液氮用于后期疾病biomarker分析。

3）病理組織切片

同一只動物身上取受損處脊髓，未損傷處脊髓，腎臟+輸尿管+膀胱各2份樣本，其中一份用福爾馬林固定，每份樣本各做橫切，縱切兩片切片，分析同一只動物之間受損與未受損脊髓之間的差異，和分析不同動物組別之間受損脊髓之間差異。評估藥物干預對脊髓修復的差異。

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