北上廣深的疫情防控逐漸放開了，師兄也終于順利畢業了。臨行前實驗室師兄弟姐妹一起吃了頓踐行飯，飯桌間除了對師兄表示熱烈祝賀之外，剩下的就是我們的滿腹牢騷和對未來的迷茫擔憂。師兄看著我們一副副未老先衰的面孔，語重心長地說：“世界上沒有什么無心插柳，有的只是努力奮斗之后的水到渠成”，然后指著自己的額頭，“看這發際線都后移到頭頂了，你們的都還在哈。”，氣氛活躍之際，師兄從懷里掏出一本筆記本秘籍，“這本筆記本秘籍就留給你們參考吧，里面記錄了我這數年動物實驗的避雷指南，希望對你們有用”，說完交到我手里，風度翩翩消失在黑夜里……

我如獲珍寶，伴著大家的默默期待下，打開了秘籍第一頁——乳腺癌動物造模避雷指南，這正好和我開展的課題相關，我激動得熱淚盈眶，這對我來說，無異于雪中送炭！這一刻，覺得作為一個基層科研求學女，也有救了！

這個世界對女人有太多的要求，既要上的廳堂，又要下的廚房；既要美貌如花，還要能掙錢養家。職場家庭里受到委屈，在面對娃的那一刻，忍一時，內分泌紊亂，退一步，乳腺增生，甚至癌變……

世界衛生組織國際癌癥研究機構在報告中指出，2020 年乳腺癌成為全球發病率最高的癌癥[1]，最新研究發現，全球每 76 s 就有一位乳腺癌確診患者，這極大威脅了女性的生命健康和生活品質^[2]。而動物模型( animal model of human diseases)是現代生物醫學研究中極為重要的一種實驗方法和手段^[3]，通過動物模型能方便，高效地認識人類疾病的發生、發展規律和研究防治措施^[4]。

乳腺癌動物模型可選動物有常規小鼠、大鼠、轉基因鼠、免疫缺陷鼠、犬、豬、兔和斑馬魚等。由于大、小鼠繁殖能力強、飼養條件低、實驗操作簡單等，應用最為廣泛。

制備小鼠乳腺移植瘤模型，可通過皮下注射、尾靜脈注射、乳墊以及心內注射 4 種方法，最終發現乳墊注射制備的乳腺癌模型與臨床病理較類似，比較適合藥理學評價和疾病機制的研究^[5]。目前男性乳腺癌( MBC) 是一種罕見的惡性腫瘤，其死亡率遠遠高于女性^[6]。最近幾年，男性乳腺癌的發病率竟然也呈現出升高的趨勢[7]，而在動物造模時多用雌性小鼠，雄性的生理特點與患乳腺癌的內在聯系值得科學家們更深入研究探討。

4T1 細胞乳腺癌動物造模避雷指南 

4T1 細胞株因其惡性程度高易成瘤，自發向肺、肝、腦等部位轉移成為廣泛使用的移植瘤細胞。此外，4T1 細胞移植瘤模型的生長狀態及轉移部位與人類晚期乳腺癌非常類似，該模型被廣泛應用于評估晚期乳腺癌藥物的研究。

然而細胞注射成瘤模型看似簡單，最終的成瘤效果漂不漂亮跟諸多因素密切相關。師兄的秘籍里面全方位地總結了他的研究歷程，現在來跟大家一一分享：

1、腫瘤測量：4T1 細胞皮下接種成瘤，移植瘤的大小通過測量腫瘤的長徑和短徑尺寸計算而來，不同實驗者對同一腫瘤的測量結果無法從客觀上統一，因此建議始終由同一人進行腫瘤測量，減少因不同人測量造成體積測量的誤差。

2、接種細胞數目：在細胞數目方面尚未有統一標準。從部分文獻的統計結果來看，細胞數目的使用范圍在 3×104～ 1 × 107個/只小鼠之間，跨度可達 300 倍以上，這必然會影響藥效評價，不利于臨床轉化。細胞數目的選擇與多個方面密切相關，諸如移植瘤的類型( 原位或皮下) 、植瘤方式( 直接注射或者手術植入) 、實驗目的( 抑制轉移或者抑制原發灶) 等。作為一個折中方案，( 0. 3 ～ 1. 0) ×106個/只小鼠的細胞數目值得考慮。

3、細胞濃度：在確認細胞數目的前提下，細胞濃度對植瘤效果也有顯著影響。其影響往往是隱性的，比如細胞被懸浮在分散介質中有自發聚集沉淀的傾向，細胞濃度越大沉淀可能越快; 細胞過密也會影響自身活性，最終導致移植瘤不均一。細胞濃度由細胞使用數目與注射體積確定，在一般的移植瘤模型中注射體積多為 100ul，因此細胞濃度在 107級別及以下較為合理。

為了保證模型均勻、藥效評價客觀，在實驗過程中仍需注意某些問題: ( 1) 最好將細胞按每只小鼠的注射量單獨分裝; ( 2) 臨注射前輕柔吹打使細胞充分分散; ( 3) 在盡量短的時間內用完細胞，防止活性降低影響成瘤。

4、小鼠周齡的選擇：小鼠的年齡與體重由植瘤方式和位置決定，多數研究采用 4 ～ 6 周齡、體重 18～ 22 g 的小鼠，然而這并非最佳選擇。如果構建皮下瘤模型，4 ～ 6 周齡的小鼠足以滿足要求; 若是制作原位瘤采取脂肪墊注射的方法，此時小鼠的乳腺發育不夠充分，接種時容易漏掉細胞。因此，7 ～ 8周齡的小鼠更適合原位脂肪墊注射。

今天的知識分享就到這啦，更多動物科研服務，歡迎致電：0755-86325431.

參考資料：

[1] Latest global cancer data: Cancer burden rises to 19. 3 million new cases and 10. 0 million cancer deaths in 2020． ［J / OL］ https: / / www． iarc． fr / fr / news-events / latest-global-cancer-data-cancer-burden-rises-to-19-3-million-new-cases-and-10-0-million-cancer-deaths-in-2020 / ．

[2]何玲，徐佳，羅弘杉，等． 體內外乳腺癌模型的研究進展［J］． 腫瘤，2020，40( 10) : 725－732．

[3]苗明三，馬林納，彭孟凡，等． 中醫藥動物模型研究現狀［J］． 中國比較醫學雜志，2022，32( 1) : 141－146．

[4]王梓儀，黃淑敏，張倩，等． 基于中西醫臨床病癥特點的甲狀腺功能亢進癥動物模型分析 ［J］． 中國實驗方劑學雜志，2022，28( 6) : 192－198．

[5]孫麗華，崔海峰，彭博，等． 4 種方法制備小鼠乳腺癌移植瘤模型的比較研究 ［J］． 中國新藥雜志，2020，29 ( 4) : 449－455．

[6]Fentiman IS，Fourquet A，Hortobagyi GN． Male breast cancer［J］． Lancet，2006，367( 9510) : 595－604．

[7]Abdelwahab Yousef AJ． Male breast cancer: epidemiology andrisk factors ［J］． Semin Oncol，2017，44( 4) : 267－272．