您是否有這樣的困惑？
老是重復不出文獻里的細胞實驗數(shù)據(jù)！
是否有這種不太喜歡的經(jīng)歷？
細胞實驗結(jié)果總是不達預期？
甚至連自己也無法重復曾經(jīng)做過的細胞實驗結(jié)果！
面對這些問題，您是否懷疑過您用的細胞或者文獻里用的細胞不是真的該細胞！
不是真的該細胞！

        據(jù)統(tǒng)計，現(xiàn)在有大約30%的細胞系污染有別的細胞，或者被錯誤辨識（就是本來是A細胞，卻被當著B細胞在使用）。被污染或錯誤辨識的細胞導致結(jié)果不可重復，或者結(jié)論錯誤。由此導致浪費了自己大量的時間，金錢，甚至被同行看輕......

        包括Nature、Science等著名雜志，以及ATCC、NIH等機構(gòu)都呼吁科研人員對細胞進行鑒定?，F(xiàn)在，越來越多的雜志在投稿時要求撰稿人提供細胞STR分析數(shù)據(jù)。
 

          STR（Short tandem repeats，短串聯(lián)重復序列），顧名思義，指短的（核心序列一般是2-6個堿基），連成串的，重復序列。分布廣泛（廣泛分布于人和哺乳動物基因組，約占人類基因組序列的3%），串聯(lián)的堿基重復次數(shù)不同而具有高度的多態(tài)性。

如：CACACACA、AATGAATGAATG等

現(xiàn)在，STR已被ATCC等機構(gòu)作為細胞鑒定的金標準。

STR分型分為四步：



一、DNA提取
         可用市面上商業(yè)化的DNA提取試劑盒進行?？偟脑瓌t是：提取的DNA純度要高，無蛋白、RNA、脂類、糖類等污染；提取的DNA完整，片段要長，無降解。

二、PCR擴增
         這一步，要用PCR技術(shù)對目的片段進行擴增。這里常采用多重熒光PCR進行。一種細胞在一個基因位點上與別的細胞相似的幾率較大，但同時在幾個至幾十個位點相似的幾率就極小。因此，這里會對多個位點進行擴增，常常采用多重PCR進行。

         普通PCR一般采用1對引物擴增1個目的片段，這里要對多個位點進行擴增，就需要設計多對引物。并且要注意引物擴增片段的長短，引物之間不能有相互作用，各對引物的退火溫度要趨于一致。如果采用熒光標記，一般將熒光染料標記在目標序列其中一條引物的5’端，并且產(chǎn)物長度相同的片段的引物要標記不同顏色熒光。一般目的片段長度相差10bp以上的可以標記相同的熒光。為了避免熒光干擾，所用熒光染料的發(fā)射波長也要相差越大越好。

三、電泳

        電泳可以采用PAGE，再銀染。現(xiàn)在，多重熒光PCR后常采用毛細管電泳進行。毛細管電泳具有效率高，自動化程度高，易于分析等優(yōu)點。其由電源、熒光光源、檢測器、進樣裝置、電泳裝置、電腦等構(gòu)成。
 

        這里一般采用毛細管凝膠電泳，當多重熒光PCR產(chǎn)物通過進樣端進入到毛細管中后，變性的DNA在電泳中，DNA片段從小到大，依次通過位于正極的檢測器。在這里，熒光染料受到激發(fā)，發(fā)出的光按強度被記錄下來。根據(jù)各片段通過的時間和熒光強度和顏色制成圖譜。
 

四、數(shù)據(jù)分析

         將未知細胞的圖譜與以同樣方式等到的確定的基因Ladder相比較，從而得到未知樣品的分型。在STR分型圖譜中，一個基因位點上為單峰，表示是純合子；雙峰表示雜合子；如果出現(xiàn)3個及以上的峰，表示有交叉污染或是有多倍體。峰越高表示該片段含量越多。在同一個位點上，出現(xiàn)在前面的峰，其片段長度短于后出現(xiàn)的峰。

拓普生物采用除包括ATCC檢測的8個STR和1個性別決定位點外，還增加了12個位點 ，共檢測21個STR位點。

STR分型圖譜示例：