細胞毒性是由細胞或化學物質引起的單純細胞殺傷事件，不依賴于凋亡或壞死的細胞死亡機理。藥物篩選常常要涉及到特定物質對細胞毒性的檢測。有研究顯示化學物質體外細胞毒性與其引起的動物死亡率及人體死亡的血藥濃度之間都存在良好的相關性。化學物質產生的損傷和死亡，最終可表現為細胞水平上的改變，由此推測體外細胞毒性可以預測體內急性毒性。利用細胞毒理學比較多種檢測終點、不同組織和種屬的預測能力，發現嚙齒動物細胞系對嚙齒動物急性毒性，人源細胞系對人體急性毒性均有良好的預測能力。

  
  體外方法有助于預測化學物質急性暴露引發的全身和局部影響，并評估體內毒性濃度。因此進行急性毒性檢測前首先進行體外細胞毒性分析，然后根據RC預測模型進行LD50值預測，選擇體內急性毒性最適宜的開始劑量，減少實驗動物的使用。

CCK-8法檢測細胞增殖和毒性分析

CCK8全稱為cell?counting?kit-8試劑，可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。該試劑的關鍵組分是水溶性唑鹽WST–8:化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽，它在電子載體1-Methoxy PMS的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產物。生成的甲臜物的數量與活細胞的數量成正比。用酶聯免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。

CCK-8法 KO MTT 法的優勢：

重復性優于MTT；

CCK-8法對細胞比較友好，毒性小，線性范圍更寬，靈敏度更高；

水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細胞；

CCK-8法細胞毒性檢測步驟可以按照試劑盒說明一步一步來即可，這里就不在累贅了，但是，重點來了！tips還是非常重要滴，拿走不謝~~

1、首次做實驗時,建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK8試劑后的培養時間；

2、接種時注意細胞懸液一定要混勻,以避免細胞沉淀下來,導致每孔中的細胞數量不等,可以每接種幾個孔就混勻一下；

3、懸浮細胞與貼壁細胞相比較難顯色。對于懸浮細胞在加入CCK-8培養1-4小時后,可先從培養箱中取出,目測染色程度或用酶標儀測定決定。若顯色困難,可將培養板放回培養箱,繼續培養數小時后再確定；

4、 加CCK-8試劑時，斜貼著培養壁加，不要插到培養基液面下，容易產生氣泡，會干擾O.D值讀數；

5、為使CCK-8試劑和培養基充分混勻,建議在加入CCK-8試劑后輕輕振搖培養板。為了避免加樣時由于CCK-8試劑在槍頭上的殘留所帶來的誤差,可以在加樣前用培養基稀釋CCK-8試劑并混勻后加樣；

6、如果待測物質有還原性，就會和CCK-8試劑發生顯示反應，增加吸光度，如果藥物有氧化性則降低吸光度。請檢查背景的OD值，即在不含細胞的培養基中加入藥物,然后加入CCK-8試劑在一定時間內檢測,和不加藥物的培養基進行比較(只加CCK-8試劑),如果OD值明顯偏高,則說明有反應，也可以在加CCK-8之前更換新鮮培養基，去掉藥物影響。

7、加入待測物質的濃度需要多參考文獻，選擇合適的濃度梯度進行篩選。

8、盡量使用多通道移液器，可以減少平行孔間差異。

9、如果樣品為高渾濁度的細胞懸液，可以設定600nm作為參比波長，扣除參比波長的OD值。